Grant amount：\4550000 （ Direct Cost: \3500000 、 Indirect Cost：\1050000 ）

2023年度は好中球を尿酸結晶で刺激することで顆粒内のβ2-microglobulinが細胞質へ流出し、pyrinと結合、pyrin inflammasomeを形成することを検証した。健常人の全血より比重液も用いて顆粒球を分離、低濃度のlipopolysaccharideで刺激を行った後に尿酸結晶を加え、β2-microglobulinとpyrinの局在を免疫染色法により確認した。
その結果、刺激前の好中球ではβ2-microglobulin、pyrinともに好中球内にびまん性に局在していたが、尿酸結晶刺激により一部の好中球でβ2-microglobulinとpyrinが偏在するようになり、共局在していることが確認できた。尿酸結晶は低濃度や短時間の刺激では好中球に目立った変化は見られず、逆に高濃度で2時間以上刺激した場合にはNETosisを起こしてしまい、核を失った好中球が認められた。このことから好中球に対して過剰な刺激を加えるとpyrin inflammasome形成以前にNETosisを介した細胞死が起きてしまうことが推測された。
さらに尿酸刺激によるβ2-microglobulinとpyrinの結合がpyrin inflammasomeの形成を誘導しているか確認するために刺激後の好中球でpyrinとpyrin inflammasomeの構成要素であるPSTPIP1が共局在していることも確認できた。これらの結果を踏まえ、現在この過程がコルヒチン投与によって阻害されるかを検証している。
研究計画段階ではproximity ligation assayを用いてβ2-microglobulinとpyrinの結合を検証する予定であったが、当研究施設が新たに蛍光顕微鏡を導入したことを受けてより情報量が得られる免疫染色法で研究を進める方針へ修正を行った。

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